foodmetaFOOD METAENGINEERINGFOOD METAENGINEERING2949-6497All-Russian Dairy Research Institute10.37442/fme.2024.4.67foodmeta-67Research ArticleОригинальное эмпирическое исследованиеOriginal Empirical ResearchИсследование продуцирования экзополисахаридов молочнокислыми бактериями, применяемыми в хлебопекарной промышленности, и сравнение методов их определенияStudy of Exopolysaccharide Production by Lactic Acid Bacteria used in the Baking Industry and Comparison of Methods for Their Determinationhttps://orcid.org/0000-0002-4026-5789МартиросянВладимир ВикторовичMartirosyanVladimir V.v.martirosyan@gosniihp.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7854-3513КостюченкоМарина НиколаевнаKostyuchenkoMarina N.kostuchenko@gosniihp.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8900-1565РейновМихаил ВикторовичReynovMikhail V.m.rejnov@gosniihp.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6662-7530ТюринаОльга ЕвгеньевнаTyurinaOlga E.o.tyurina@gosniihp.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2372-4277СавкинаОлеся АлександровнаSavkinaOlesia A.o.savkina@gosniihp.ruНаучно-исследовательский институт хлебопекарной промышленностиРоссияScientific Research Institute for the Baking IndustryRussian FederationСанкт-Петербургский филиал ФГАНУ НИИ хлебопекарной промышленностиRussian FederationSaint-Peterburg Branch of «Scientific Research Institute for the Baking Industry»Russian Federation202431122024241225Copyright © Мартиросян В.В., Костюченко М.Н., Рейнов М.В., Тюрина О.Е., Савкина О.А., 20242024Мартиросян В.В., Костюченко М.Н., Рейнов М.В., Тюрина О.Е., Савкина О.А.Martirosyan V.V., Kostyuchenko M.N., Reynov M.V., Tyurina O.E., Savkina O.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.fme-journal.org/jour/article/view/67Введение

Введение: Экзополисахариды представляют собой высокомолекулярные соединения, состоящие из остатков моносахаридов и их производных, обладающие биологической активностью и выполняющие протекторную роль в физиологических процессах. Поиск штаммов молочнокислых бактерий, продуцирующих экзополисахариды, является перспективным направлением исследования за счет доказанного положительного влияния их на реологические свойства ферментированных пищевых продуктов, а также здоровье человека.

Цель

Цель: Провести исследование способности штаммов молочнокислых бактерий из коллекции Федерального государственного автономного научного учреждения «Научно-исследовательский институт хлебопекарной промышленности» (далее ФГАНУ НИИХП) продуцировать экзополисахариды, а также проведение сравнения различных методов их определения – гравиметрического, фенол-сернокислого по Дюбуа, метода с применением антронового реактива и титриметрического по Бертрану.

Материалы и методы

Материалы и методы: Для определения способности продуцировать экзополисахариды культуры молочнокислых бактерий культивировали на 12% солодовом сусле в течение 48 ч при оптимальной для каждого штамма температуре. После удаления белка и проведения диализа в культуральной жидкости определяли количество экзополисахаридов различными методами.

Результаты

Результаты: Установлено, что все коллекционные штаммы образовывали экзополисахариды в разном количестве. Определены штаммы, продуцирующие наибольшее количество экзополисахаридов – L. amilolyticus-2, L. plantarum А-63(d), L. amilolyticus -1, L. brevis-78(d), L. paracasei-6. Выход продукта, содержащего экзополисахариды, продуцентами которых являлись молочнокислые бактерии, находился в пределах от 7 до 14,4 мг в 1 мл культуральной жидкости. Результаты исследования позволили сделать вывод о корректности метода Дюбуа для оценки содержания применительно к экзополисахаридам, продуцируемым молочнокислыми бактериями.

Выводы

Выводы: Проведенные исследования подтверждают способность штаммов молочнокислых бактерий из коллекции ФГАНУ НИИХП продуцировать экзополисахариды. Установлена корректность метода по Дюбуа для определения экзополисахаридов, продуцируемых молочнокислыми бактериями.

 

 

 

 

Introduction

Introduction: Exopolysaccharides are high molecular weight compounds consisting of monosaccharide residues and their derivatives, which have biological activity and play a protective role in physiological processes. The search for strains of lactic acid bacteria producing exopolysaccharides is a promising area of research due to their proven positive effect on the rheological properties of fermented food products, as well as human health.

Purpose

Purpose: To study the ability of lactic acid bacteria strains from the collection of FGANU NIIHP to produce exopolysaccharides, as well as to compare different methods of their determination - gravimetric, phenol-sulfuric acid Dubois method, anthrone reagent method and titrimetric Bertrand method.

Materials and Methods

Materials and Methods: To determine the ability to produce exopolysaccharides, cultures of lactic acid bacteria were cultured on 12% malt mash for 48 hours at the optimum temperature for each strain. After protein removal and dialysis, the amount of exopolysaccharides was determined in the culture fluid by different methods.

Results

Results: It was found that all the collection strains formed exopolysaccharides in different amounts. The strains producing the highest amount of exopolysaccharides were identified as L.amilolyticus-2, L. plantarumA-63(d), L.amilolyticus-1, L.brevis-78(d), L. paracasei-6. The yield of the product containing exopolysaccharides produced by lactic acid bacteria ranged from 7 to 14.4 mg in 1 ml of culture liquid. The results of the study allowed us to conclude the correctness of Dubois method for estimating the content with respect to exopolysaccharides produced by lactic acid bacteria.

Conclusion

Conclusion: The conducted studies confirm the ability of strains of lactic acid bacteria, from the collection of FGANU NIIHP, to produce exopolysaccharides. The correctness of the Dubois method for the determination of exopolysaccharides produced by lactic acid bacteria was established.

молочнокислые бактерииэкзополисахаридыфенол-сернокислый метод по Дюбуаантроновый реактивтитрометрический метод по БертрануLactic acid bacteriaexopolysaccharidesDubois phenol-sulfuric acid methodanthrone reagentBertrand titrometric methodReferencesАбрамова, А.Л. (2009). Методы определения экзополисахаридов (ЭПС). Научное обеспечение молочной промышленности (ВНИМИ - 80 лет) (c. 8-12). Место издания: ВНИМИ.Абрамова, А.Л. (2009). Методы определения экзополисахаридов (ЭПС). Научное обеспечение молочной промышленности (ВНИМИ - 80 лет) (c. 8-12). Место издания: ВНИМИ.Винокуров, В. А., Грайфер, В. И., Гринберг, Т. А., Пирог, Т. П., Владимиров, А. И., & Исмагилов, А. М. (2004). Способ получения экзополисахаридов (Патент РФ № 2 241 037). Российское патентное ведомство. Опубликовано 27.11.2004, Бюл. № 33.Винокуров, В. А., Грайфер, В. И., Гринберг, Т. А., Пирог, Т. П., Владимиров, А. И., & Исмагилов, А. М. (2004). Способ получения экзополисахаридов (Патент РФ № 2 241 037). Российское патентное ведомство. Опубликовано 27.11.2004, Бюл. № 33.Григорьев, Е. Ф., Болоховская, В. А., Халабузарь, В. Г., Кравец, Л. Ф., Дерябин, В. В., & Бовина, Е. В. (1990). Способ выделения экзополисахаридов (Патент СССР № 1 549 996). Патентное ведомство СССР. Опубликовано 15.03.1990.Григорьев, Е. Ф., Болоховская, В. А., Халабузарь, В. Г., Кравец, Л. Ф., Дерябин, В. В., & Бовина, Е. В. (1990). Способ выделения экзополисахаридов (Патент СССР № 1 549 996). Патентное ведомство СССР. Опубликовано 15.03.1990.Еникеев, Р. Р., Бобошко, Д. Н., Руденко, Е. Ю., & Зимичев, А. В. (2011). Способ количественного анализа полисахарида, производимого молочнокислыми бактериями (Патент РФ № 2 437 092). Российское патентное ведомство. Опубликовано 20.12.2011, Бюл. № 35.Еникеев, Р. Р., Бобошко, Д. Н., Руденко, Е. Ю., & Зимичев, А. В. (2011). Способ количественного анализа полисахарида, производимого молочнокислыми бактериями (Патент РФ № 2 437 092). Российское патентное ведомство. Опубликовано 20.12.2011, Бюл. № 35.Кичемазова, Н.В. (2019). Экзополисахариды бактерий родов Xanthobacter и Ancylobacter: характеристика и их биологические свойства [Диссертация на соиск. уч. ст. к. биол. н.]. ФГБОУ ВО Вавиловский Университет.Кичемазова, Н.В. (2019). Экзополисахариды бактерий родов Xanthobacter и Ancylobacter: характеристика и их биологические свойства [Диссертация на соиск. уч. ст. к. биол. н.]. ФГБОУ ВО Вавиловский Университет.Куис, Л. В., & Маркевич, Р. М. (2009). Выделение, фракционирование и анализ экзополисахаридов Bacillus mucilaginosus. Труды БГТУ. Серия 2: Химические технологии, биотехнология, геоэкология (c. 170-173). Минск: БГТУ.Куис, Л. В., & Маркевич, Р. М. (2009). Выделение, фракционирование и анализ экзополисахаридов Bacillus mucilaginosus. Труды БГТУ. Серия 2: Химические технологии, биотехнология, геоэкология (c. 170-173). Минск: БГТУ.Локачук, М. Н., Савкина, О.А., Павловская, Е. Н., Фролова, Ю. М., Костюченко, М. Н., & Мартиросян, В. В. (2023). Современная таксономия и разнообразие молочнокислых бактерий в заквасках. Хлебопродукты, (6), 28-35. https://doi.org/10.32462/0235-2508-2023-32-6-28-35Локачук, М. Н., Савкина, О.А., Павловская, Е. Н., Фролова, Ю. М., Костюченко, М. Н., & Мартиросян, В. В. (2023). Современная таксономия и разнообразие молочнокислых бактерий в заквасках. Хлебопродукты, (6), 28-35. https://doi.org/10.32462/0235-2508-2023-32-6-28-35Фокина, Н.А. (2015). Экзополисахарид Streptococcus Thermophilus: условия выделения и свойства. Актуальная биотехнология, 14(3), 41-42.Фокина, Н.А. (2015). Экзополисахарид Streptococcus Thermophilus: условия выделения и свойства. Актуальная биотехнология, 14(3), 41-42.Хусаинов, И.А. (2014). Современные представления о биосинтезе бактериальных экзополисахаридов. Вестник Казанского технологического университета, 17(5), 167-172.Хусаинов, И.А. (2014). Современные представления о биосинтезе бактериальных экзополисахаридов. Вестник Казанского технологического университета, 17(5), 167-172.Amiri, S., Rezaei Mokarram, R., Sowti Khiabani, M., Rezazadeh Bari, M., & Alizadeh Khaledabad, M. (2019). Exopolysaccharides production by Lactobacillus acidophilus LA5 and Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB12: Optimization of fermentation variables and characterization of structure and bioactivities. International Journal of Biological Macromolecules, 123, 752-765. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2018.11.084Amiri, S., Rezaei Mokarram, R., Sowti Khiabani, M., Rezazadeh Bari, M., & Alizadeh Khaledabad, M. (2019). Exopolysaccharides production by Lactobacillus acidophilus LA5 and Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB12: Optimization of fermentation variables and characterization of structure and bioactivities. International Journal of Biological Macromolecules, 123, 752-765. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2018.11.084Cerning, J., Bouillanne, C., & Desmazeaud, M. J. (1988). Exocellular polysaccharide production by Streptococcus thermophiles. Biotechnology Letters, 10, 255–260. https://doi.org/10.1007/BF01024415Cerning, J., Bouillanne, C., & Desmazeaud, M. J. (1988). Exocellular polysaccharide production by Streptococcus thermophiles. Biotechnology Letters, 10, 255–260. https://doi.org/10.1007/BF01024415Daba, G. M., Elnahas, M. O., & Elkhateeb, W. A. (2021). Contributions of exopolysaccharides from lactic acid bacteria as biotechnological tools in food, pharmaceutical, and medical applications. International Journal of Biological Macromolecules, 173, 79-89. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2021.01.110Daba, G. M., Elnahas, M. O., & Elkhateeb, W. A. (2021). Contributions of exopolysaccharides from lactic acid bacteria as biotechnological tools in food, pharmaceutical, and medical applications. International Journal of Biological Macromolecules, 173, 79-89. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2021.01.110Das, L., Raychaudhuri, U., & Chakraborty, R. (2015). Effects of hydrocolloids as texture improver in coriander bread. Journal of Food Science and Technology, 52(6), 3671–3680. https://doi.org/10.1007/s13197-014-1296-8Das, L., Raychaudhuri, U., & Chakraborty, R. (2015). Effects of hydrocolloids as texture improver in coriander bread. Journal of Food Science and Technology, 52(6), 3671–3680. https://doi.org/10.1007/s13197-014-1296-8Dilna, S. V., Surya, H., Aswathy, R. G., Varsha, K. K., Sakthikumar, D. N., Pandey, A., & Nampoothiri, K. M. (2015). Characterization of an exopolysaccharide with potential health-benefit properties from a probiotic Lactobacillus plantarum RJF4. LWT - Food Science and Technology, 64(2), 1179-1186. https://doi.org/10.1016/j.lwt.2015.07.040Dilna, S. V., Surya, H., Aswathy, R. G., Varsha, K. K., Sakthikumar, D. N., Pandey, A., & Nampoothiri, K. M. (2015). Characterization of an exopolysaccharide with potential health-benefit properties from a probiotic Lactobacillus plantarum RJF4. LWT - Food Science and Technology, 64(2), 1179-1186. https://doi.org/10.1016/j.lwt.2015.07.040Dubois, M., Gilles, K. A., Hamilton, J. K., Rebers, P. A., & Smith, F. (1956). Colorimetric method for determination of sugars and related substances. Analytical Chemistry, 28(3), 350–356. https://doi.org/10.1021/ac60111a017Dubois, M., Gilles, K. A., Hamilton, J. K., Rebers, P. A., & Smith, F. (1956). Colorimetric method for determination of sugars and related substances. Analytical Chemistry, 28(3), 350–356. https://doi.org/10.1021/ac60111a017Galle, S., Schwab, C., Arendt, E., & Gänzle, M. (2010). Exopolysaccharide-forming Weissella strains as starter cultures for sorghum and wheat sourdoughs. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 58(9), 5834–5841. https://doi.org/10.1021/jf1002683Galle, S., Schwab, C., Arendt, E., & Gänzle, M. (2010). Exopolysaccharide-forming Weissella strains as starter cultures for sorghum and wheat sourdoughs. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 58(9), 5834–5841. https://doi.org/10.1021/jf1002683Goh, K. K. T., Haisman, D. R., Archer, R. H., & Singh, H. (2005). Evaluation and modification of existing methods for the quantification of exopolysaccharides in milk-based media. Food Research International, 38(6), 605-613. https://doi.org/10.1016/j.foodres.2004.11.014Goh, K. K. T., Haisman, D. R., Archer, R. H., & Singh, H. (2005). Evaluation and modification of existing methods for the quantification of exopolysaccharides in milk-based media. Food Research International, 38(6), 605-613. https://doi.org/10.1016/j.foodres.2004.11.014Jurášková, D., Ribeiro, S. C., & Silva, C. C. G. (2022). Exopolysaccharides produced by lactic acid bacteria: From biosynthesis to health-promoting properties. Foods, 11(2), 156. https://doi.org/10.3390/foods11020156Jurášková, D., Ribeiro, S. C., & Silva, C. C. G. (2022). Exopolysaccharides produced by lactic acid bacteria: From biosynthesis to health-promoting properties. Foods, 11(2), 156. https://doi.org/10.3390/foods11020156Katina, K., Maina, N. H., Juvonen, R., Flander, L., Johansson, L., Virkki, L., Tenkanen, M., & Laitila, A. (2009). In situ production and analysis of Weissella confusa dextran in wheat sourdough. Food Microbiology, 26(7), 734–743. https://doi.org/10.1016/j.fm.2009.07.008Katina, K., Maina, N. H., Juvonen, R., Flander, L., Johansson, L., Virkki, L., Tenkanen, M., & Laitila, A. (2009). In situ production and analysis of Weissella confusa dextran in wheat sourdough. Food Microbiology, 26(7), 734–743. https://doi.org/10.1016/j.fm.2009.07.008Kavitake, D., Devi, P. B., Singh, S. P., & Shetty, P. H. (2016). Characterization of a novel galactan produced by Weissella confusa KR780676 from an acidic fermented food. International Journal of Biological Macromolecules, 86, 681–689. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2016.01.099Kavitake, D., Devi, P. B., Singh, S. P., & Shetty, P. H. (2016). Characterization of a novel galactan produced by Weissella confusa KR780676 from an acidic fermented food. International Journal of Biological Macromolecules, 86, 681–689. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2016.01.099Kim, Y., Oh, S., Yun, H. S., Oh, S., & Kim, S. H. (2010). Cell-bound exopolysaccharide from probiotic bacteria induces autophagic cell death of tumour cells. Letters in Applied Microbiology, 51(2), 123-130. https://doi.org/10.1111/j.1472-765X.2010.02859.xKim, Y., Oh, S., Yun, H. S., Oh, S., & Kim, S. H. (2010). Cell-bound exopolysaccharide from probiotic bacteria induces autophagic cell death of tumour cells. Letters in Applied Microbiology, 51(2), 123-130. https://doi.org/10.1111/j.1472-765X.2010.02859.xKorcz, E., & Varga, L. (2021). Exopolysaccharides from lactic acid bacteria: Techno-functional application in the food industry. Trends in Food Science & Technology, 110, 375-384. https://doi.org/10.1016/j.tifs.2021.02.014Korcz, E., & Varga, L. (2021). Exopolysaccharides from lactic acid bacteria: Techno-functional application in the food industry. Trends in Food Science & Technology, 110, 375-384. https://doi.org/10.1016/j.tifs.2021.02.014Masuko, T., Minami, A., Iwasaki, N., Majima, T., Nishimura, S., & Lee, Y. C. (2005). Carbohydrate analysis by a phenol-sulfuric acid method in microplate format. Analytical Biochemistry, 339(1), 69-72. https://doi.org/10.1016/j.ab.2004.12.001Masuko, T., Minami, A., Iwasaki, N., Majima, T., Nishimura, S., & Lee, Y. C. (2005). Carbohydrate analysis by a phenol-sulfuric acid method in microplate format. Analytical Biochemistry, 339(1), 69-72. https://doi.org/10.1016/j.ab.2004.12.001Moroni, A. V., Arendt, E. K., & Dal Bello, F. (2011). Biodiversity of lactic acid bacteria and yeasts in spontaneously-fermented buckwheat and teff sourdoughs. Food Microbiology, 28(3), 497–502. https://doi.org/10.1016/j.fm.2010.10.016Moroni, A. V., Arendt, E. K., & Dal Bello, F. (2011). Biodiversity of lactic acid bacteria and yeasts in spontaneously-fermented buckwheat and teff sourdoughs. Food Microbiology, 28(3), 497–502. https://doi.org/10.1016/j.fm.2010.10.016Nguyen, P. T., Nguyen, T. T., Bui, D. C., Hong, P. T., Hoang, Q. K., & Nguyen, H. T. (2020). Exopolysaccharide production by lactic acid bacteria: The manipulation of environmental stresses for industrial applications. AIMS Microbiology, 6(4), 451-469. https://doi.org/10.3934/microbiol.2020027Nguyen, P. T., Nguyen, T. T., Bui, D. C., Hong, P. T., Hoang, Q. K., & Nguyen, H. T. (2020). Exopolysaccharide production by lactic acid bacteria: The manipulation of environmental stresses for industrial applications. AIMS Microbiology, 6(4), 451-469. https://doi.org/10.3934/microbiol.2020027Oleksy-Sobczak, M., Klewicka, E., & Piekarska-Radzik, L. (2020). Exopolysaccharides production by Lactobacillus rhamnosus strains – Optimization of synthesis and extraction conditions. LWT, 122, 109055. https://doi.org/10.1016/j.lwt.2020.109055Oleksy-Sobczak, M., Klewicka, E., & Piekarska-Radzik, L. (2020). Exopolysaccharides production by Lactobacillus rhamnosus strains – Optimization of synthesis and extraction conditions. LWT, 122, 109055. https://doi.org/10.1016/j.lwt.2020.109055Patel, S., Majumder, A., & Goyal, A. (2012). Potentials of exopolysaccharides from lactic acid bacteria. Indian Journal of Microbiology, 52(1), 3-12. https://doi.org/10.1007/s12088-011-0148-8Patel, S., Majumder, A., & Goyal, A. (2012). Potentials of exopolysaccharides from lactic acid bacteria. Indian Journal of Microbiology, 52(1), 3-12. https://doi.org/10.1007/s12088-011-0148-8Prete, R., Alam, M. K., Perpetuini, G., Perla, C., Pittia, P., & Corsetti, A. (2021). Lactic acid bacteria exopolysaccharides producers: A sustainable tool for functional foods. Foods, 10, 1653. https://doi.org/10.3390/foods10071653Prete, R., Alam, M. K., Perpetuini, G., Perla, C., Pittia, P., & Corsetti, A. (2021). Lactic acid bacteria exopolysaccharides producers: A sustainable tool for functional foods. Foods, 10, 1653. https://doi.org/10.3390/foods10071653Piermaria, J. A., De La Canal, M. L., & Abraham, A. G. (2008). Gelling properties of kefiran, a food-grade polysaccharide obtained from kefir grain. Food Hydrocolloids, 22, 1520–1527. https://doi.org/10.1016/j.foodhyd.2007.10.005Piermaria, J. A., De La Canal, M. L., & Abraham, A. G. (2008). Gelling properties of kefiran, a food-grade polysaccharide obtained from kefir grain. Food Hydrocolloids, 22, 1520–1527. https://doi.org/10.1016/j.foodhyd.2007.10.005Ruhmkorf, C., Jungkunz, S., Wagner, M., & Vogel, R. F. (2012). Optimization of homoexopolysaccharide formation by lactobacilli in gluten-free sourdoughs. Food Microbiology, 32(2), 286–294. https://doi.org/10.1016/j.fm.2012.07.002Ruhmkorf, C., Jungkunz, S., Wagner, M., & Vogel, R. F. (2012). Optimization of homoexopolysaccharide formation by lactobacilli in gluten-free sourdoughs. Food Microbiology, 32(2), 286–294. https://doi.org/10.1016/j.fm.2012.07.002Rühmann, B., Schmid, J., & Sieber, V. (2015). Methods to identify the unexplored diversity of microbial exopolysaccharides. Frontiers in Microbiology, 6, 565. https://doi.org/10.3389/fmicb.2015.00565Rühmann, B., Schmid, J., & Sieber, V. (2015). Methods to identify the unexplored diversity of microbial exopolysaccharides. Frontiers in Microbiology, 6, 565. https://doi.org/10.3389/fmicb.2015.00565Ruijssenaars, H. J., Stingele, F., & Hartmans, S. (2000). Biodegradability of food-associated extracellular polysaccharides. Current Microbiology, 40, 194-199.Ruijssenaars, H. J., Stingele, F., & Hartmans, S. (2000). Biodegradability of food-associated extracellular polysaccharides. Current Microbiology, 40, 194-199.Ryan, P. M., Ross, R. P., Fitzgerald, G. F., Caplice, N. M., & Stanton, C. (2014). Sugar-coated: Exopolysaccharide producing lactic acid bacteria for food and human health applications. Food & Function, 6(3), 679-693. https://doi.org/10.1039/C4FO00529ERyan, P. M., Ross, R. P., Fitzgerald, G. F., Caplice, N. M., & Stanton, C. (2014). Sugar-coated: Exopolysaccharide producing lactic acid bacteria for food and human health applications. Food & Function, 6(3), 679-693. https://doi.org/10.1039/C4FO00529ESanalibaba, P., & Çakmak, G. A. (2016). Exopolysaccharides production by lactic acid bacteria. Applied Micro Open Access, 2, 1000115. https://doi.org/10.4172/2471-9315.1000115Sanalibaba, P., & Çakmak, G. A. (2016). Exopolysaccharides production by lactic acid bacteria. Applied Micro Open Access, 2, 1000115. https://doi.org/10.4172/2471-9315.1000115Zajsek, K., Gorsek, A., & Kolar, M. (2013). Cultivating conditions effects on kefiran production by the mixed culture of lactic acid bacteria imbedded within kefir grains. Food Chemistry, 139(1-4), 970-977. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.11.142Zajsek, K., Gorsek, A., & Kolar, M. (2013). Cultivating conditions effects on kefiran production by the mixed culture of lactic acid bacteria imbedded within kefir grains. Food Chemistry, 139(1-4), 970-977. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.11.142Zarour, K., Vieco, N., Pérez-Ramos, A., Nácher-Vázquez, M., Mohedano, M. L., & López, P. (2017). Food ingredients synthesized by lactic acid bacteria. In Microbial Production of Food Ingredients and Additives (pp. 89–124). Elsevier. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-811520-6.00004-0Zarour, K., Vieco, N., Pérez-Ramos, A., Nácher-Vázquez, M., Mohedano, M. L., & López, P. (2017). Food ingredients synthesized by lactic acid bacteria. In Microbial Production of Food Ingredients and Additives (pp. 89–124). Elsevier. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-811520-6.00004-0

The authors declare that there are no conflicts of interest present.